河北邢台微生物实验室基本操作要点
　　1、菌落总数GB 4789.2-2016
　　样品的称量：
　　无菌操作称取25g（固体样品）或者无菌吸取25ml（液体样品）样品，放入装有225ml的磷酸盐缓冲液（0.85%无菌生理盐水）中充分混合均匀，制备成1:10的样品匀液。
　　样品匀液稀释：
　　用1ml移液管吸取1:10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml磷酸盐缓冲液（0.85%无菌生理盐水）的无菌试管中，混合均匀制成1:100的样品匀液，以此类推。
　　平板接种：
　　根据对样品污染状况的估计,选择2个-3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),吸取1mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。吸取1mL空白稀释液加入两个无菌皿内作空白对照。用冷却至46°C的平板计数琼脂培养基(可放置于46°C±1°恒温水浴锅保温)倾注平皿,并转动平皿使其混均匀。
　　培养：
　　待琼脂凝固后将平板翻转，并放置于36°C±1°的恒温培养箱中培养48h±2h
　　菌落计数：
　　按照GB 4789.2-2016的要求计数即可。
　　2、大肠菌群GB 4789.3-2016
　　样品的称量：
　　略，同菌落总数
　　样品匀液稀释：
　　略，同菌落总数
　　平板接种：
　　同菌落总数，不同的是培养基是结晶紫中性红胆盐琼脂VRBA
　　培养：
　　待琼脂凝固后将平板翻转，并放置于36°C±1°的恒温培养箱中培养18h-24h
　　菌落计数：
　　选取菌落数在15CFU~150CFU之间的平板,分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落(如菌落直径较典型菌落小)。典型菌落为紫红色,菌落周围有红色的胆盐沉淀环。
　　最低稀释度平板低于15CFU的记录具体菌落数。
　　复发酵证实试验：
　　从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落,少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落。分别移种于BGLB肉汤管内,36°C±1°C培养24h~48h,观察产气情况。凡BGLB肉汤管产气,即可报告为大肠菌群阳性。
　　备注：
　　A做菌落总数与大肠菌群可以共用一份稀释液，其称量、稀释等步骤均一致；
　　B菌落总数与大肠菌群培养基、培养时间、菌落计数等不同；
　　C菌落总数计数即可，大肠菌群若可疑还需进行复发酵证实实验。